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組織芯片制備

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組織芯片免疫組化方法流程和注意事項

2020-06-22

組織芯片(tissue chip)又稱組織微陣列(tissue microarray,TMA),是自蛋白質芯片、基因芯片之后出現的又一種重要的生物芯片。組織芯片是一種將數十至上千個小組織整齊地排列在一張載玻片上而制成的組織切片,主要用于研究同一種基因或蛋白質分子在不同細胞或組織中表達的情況。組織芯片的出現,與基因芯片配合使用在尋找疾病基因中有很好的互補作用。在腫瘤研究中發揮著重要作用。將基因芯片篩選出的基因作成探針,再將探針與組織芯片中眾多的腫瘤組織進行熒光原位雜交,尋找腫瘤發生發展的相關因素。


免疫組化,是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應,即抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及相對定量的研究,稱為免疫組織化學技術(immunohistochemistry)或免疫細胞化學技術(immunocytochemistry)。


根據標記物的不同,免疫組化方法分為:免疫酶法、免疫熒光法、親和組織化學法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自影法等。其中前三種最常用。


人多種實體瘤腫瘤組織芯片在免疫組化染色過程中無組織脫落,不同分化程度的腺癌和鱗癌組織不等量和不同強度的表達細胞角蛋白CK,肝癌及癌旁組織、小細胞癌均呈CK陰性反應。所有組織的間質細胞表達波形蛋白Vimentin;所有組織中的血管平滑肌細胞、消化道平滑肌及子宮平滑肌瘤細胞表達SMA。免疫組化染色陽性信號清晰,組織背景干凈。另外,在組織芯片免疫組化染色過程中我們注意到在芯片邊緣的組織片的試劑覆蓋欠佳,在鏡檢中相應區域內組織的免疫組化染色多呈陰性結果。


組織芯片



最簡單的組織芯片免疫組化流程步驟



1.石蠟切片置于67℃烘箱中,烘片2小時,脫蠟至水,用pH7.4的PBS沖洗三次,每次3分鐘(3×3’)。

 

2.取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液,加入微波盒中,微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,中檔微波處理10分鐘,取出微波盒流水自然泠卻,從緩沖液中取出玻片,先用蒸餾水沖洗兩次,之后用PBS沖洗2×3’。(注:不是所有的抗體都需要微波修復的,視具體情況而定)

 

3.每張切片加1滴3%H2O2,室溫下孵育10分鐘,以阻斷內源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3’。


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